Introducción

En humanos se ha descrito una proteína placentaria con características físico-químicas y biológicas propias denominada Hormona Uterotrófica Placentaria (UTPH) (Beas and Flores, 1969).

UTPH es obtenida de placentas de término y presenta actividad biológica a nivel de útero (Beas et al., 1975), glándula mama­ria (Castillo and Beas, 1971 y 1973; Calaf et al., 1987) y embrión preimplantacional (Roblero et al., 1981 a, 1981 b y 1983). Los niveles plasmáticos de UTPH en mujeres embarazadas presentan un valor máximo en los primeros días de gestación (Beas y col., 1988).

El objetivo del presente trabajo es estudiar en bovinos la presencia de una proteína placentaria similar a UTPH, la cual podría usarse eventualmente como un marcador precoz de gestación.

Materiales y método

Utilizando un método similar al empleado por Beas y Flores (1969) para obtener UTPH humana, se usaron placentas bovi­nas de término, obtenidas de vacas de planteles lecheros con asesoría veterina­ria y registros reproductivos. En cada placenta se evaluó el aspecto, peso, color y tiempo de expulsión, como criterios de normalidad. Además se verificó que el parto Trabajo financiado por haya dado origen a una cría viva de térmi­no y en buenas condiciones. Una vez recoletada, cada placenta se trasladó al laboratorio en un recipiente con hielo para su posterior procesamiento.

Cada placenta se lavó con NaCI 0,9% mantenido a 4° C y se escogieron solamen­te los cotiledones, los cuales se pesaron y se homogenizaron en una licuadora con NaCI 0,9% (4 mi/g cotiledón). Este homo­genizado salino se liofilizó obteniéndose extracto salino seco placentario. Este extracto salino seco placentario se some­tió a extracción acética con ácido acético 0.1 N (40 ml/g extracto salino). La suspen­sión se dejó en agitación horizontal conti­nua por 16 horas a 4° C, luego se filtró a través de gasa y se liofilizó obteniéndose un extracto acético placentario.

El extracto acético (2 g) disuelto en ácido acético 0.1 N se cromatografió en Sepha­dex G-75 (Pharmacia) a temperatura ambiente en columna K 50/100 (Pharma­cia), con flujo descendente de 135 ml/h mantenido con bomba peristáltica (Vario­ perpex 1200-LKB) eluyendo con ácido acético 0.1N. Los eluidos se recolectaron en un colector automático de fracciones (Helirac-LKB) y se midió la absorbancia a 280 nm en un fotómetro (Uvicord II-LKB), la cual se registró en un inscriptor (2210­LKB). Las fracciones obtenidas se liofiliza­ron.

El estudio inmunológico de estas fraccio­nes frente al suero antiUPH humana se realizó empleando la técnica de inmunodi­fusión doble en placa de Ouchterlony (Ouchterlony, 1953).

El suero antiUPH humana se obtuvo por inmunización de UTPH humana en conejo y se absorbió con suero de mujer no embarazada en proporción 1:0.2 para remover anticuerpos no específicos de la gestación.

El suero antiproteí na placentaria de bovino se obtuvo en conejo usando cómo inmunó­geno la fracción eludía del Sephadex G-75 que presentó reacción inmunológica posi­tiva frente al suero antiUPH humana.

Este suero antiproteína placentaria de bovino se absorbió con suero de vaquilla no pre­ñada en proporción de 1:0.2 para remover los anticuerpos no específicos de gestación.

Para la obtención de ambos antisueros se emplearon conejos hembras vírgenes neozelandeses de más de 5 meses de edad, entre 2.5 a 3 Kg de peso inicial.

 

 

Resultados

En la Figura 1 se observa el perfil de elución obtenido al cromatografiar extracto acéti­co placentario bovino en Sephadex G-75. Se observan 2 picos principales: el primero que comprende las fracciones 59 a 82 y el segundo que comprende a las fracciones 125 a 170. Se juntaron los eluidos corres­pondientes a cada pico y se liofilizaron se­paradamente. Se estudió la reacción inmu­nológica por inmunodifusión doble (Ouch­terlony) de cada uno de los picos frente al suero antiUTPH humana y sólo se observó reacción positiva con el primer pico; por esta razón los demás experimentos se hicieron con este material.

Figura 1. Perfil de elución de extracto acético placentario bovino en columna de Sephadex G-75. Cada fracción corresponde a 13.4 ml

En la Figura 2 se observa la reacción entre la proteína de bovino y UTPH humana frente a suero antiUTPH humana. La pre­sencia de espolón entre las líneas de preci­pitación de la proteína de bovino y UTPH humana es, a nuestro juicio, una demostra­ción de identidad parcial entre ambas, pro­bablemente por la diferencia de especie.

Figura 2. Placa de inmunodefusión doble ( Ouchterlony) teñida con negro amido. Al centro: suero antiUTPH humana; orificios 1, 3 y 5: proteína placenteria de bovino (12, 8 y 6 mg/ml, respectivamente); orificios 2, 4 y 6: UTPH humana (11, 8 y 6 mg/ml, respectivamente).

Discusión

Los resultados presentados permiten concluir que existe una fracción proteica obtenida de cotiledones de placenta de bovino con características inmunológicas similares a UTPH.

Esta proteína de bovino en cromatografía en Sephadex G-75 tiene un volumen de elución similar al de UTPH y estudiada en placa de doble difusión (Ouchterlony) presenta comunidad inmunológica parcial con UTPH, situación que ha sido descrita en el campo de la biología para proteínas similares presentes en diferentes especies (Bambra et al., 1984; Bohn, 1979; Nishi and Hirai, 1972).

Numerosos investigadores (Ailenberg and Shemesh, 1983; Bolander and Fellows, 1976; Butler et al., 1982; Godkin et al., 1988; Sasser et al., 1989) han descrito otras proteínas propias de la preñez en vacunos. Sin embargo, ninguna de ellas ha presentado las características uterotróficas de UTPH. En nuestro laboratorio estamos investigando si esta proteína bovina comparte otras propiedades de UTPH, tanto biológicas (acción sobre útero) como físico-químicas y estudiando la posibilidad de utilizarla eventualmente como un marcador precoz de preñez.

Bibliografía

Ainlenberg, M. and M. Shemesh (1983). Partial purification of a chorionic gonado­tropin-like protein from bovine cotyledons. Biol. Reprod. 28: 517-522.

Bambra, C.S., S.S. Lynch, G.R. Foxcroft, G. Robinson and S. Amoroso (1984). Pu­rification and characterization of guinea­pig chorionic gonadotropin. J. Reprod. Fertil 71: 227-233.

Beas, F. and H. Flores (1969). Characteri­zation and properties of a new placenta¡ protein. Nature 221 (51801: 574).

Beas, F., A. Salinas, F. González, C. Teránd and P. Szendro (1975). A human placental hormone (UTPH) with uterine growth and DNA promoting effects. Horm. Metab. Res. 7(6): 515-520.

Beas, F., M.A. Boric, G. Iñiguez, M.T. Capurro, L. Roblero, A. Salinas e I. Rojas (1988). Hormona. Uterotrófica Placentaria (UTPH). Arch. Biol. Med. Exp. 21(2): R348.

Bohn, H. (1979). Isolation and characteri­zation of placenta  proteins with special reference to Pregnancy-Specific f31 Glyco­ protein and other proteins specific to the placenta. En: Placental Proteins. Klop­per, A. and T. Chard (ed.) pp. 71-88. Springer-Verlag, Berlín.

Bolander, F.F. and R.E. Fellows (1976). Purification and characterization of bovine Placental Lactogen. J. Biol. Chem. 251(9): 2703-2708.

Butler, J.E., W.C. Hamilton, R.G. Sasser, C.A. Ruder, G.M. Hass and R.J. Williams (1982). Detection and partial characteriza­tion of two bovine pregnancy-specific proteins. Biol. Reprod. 26: 925-933.

Calaf, G., M.T. Capurro, M.C. Méndez and F. Beas (1987). DNA-synthesis under the effect of a placenta protein in mammary gland in culture. Horm. Metab. Res. 19: 43-44.

Castillo, C. and F. Beas (1971). Inhibition of estradiol-progesterone-induced mammary development by a human placenta protein. Horm. Metab. Res. 3(5): 361-362.

Castillo, C. and F. Beas (1973). Crop sac stimulating activity and mammary inhibition produced by a human placenta protein. Horm. Metab. Res. 5(2): 129-133.

Godkin, J.D., B.J. Lifsey and B.E. Gillespie (1988). Characterization of bovine concep­tus proteins produced during the peri and post attachment periods of early pregnancy. Biol. Reprod. 38: 703-711.

Nishi S. and H. Hirai (1972). Purification of human, dog and rabbit alfa-fetoprotein by immunoadsorbents of sepharose coupled with anti-human alfa-fetoprotein. Biochim. Biophys Acta 278: 293-298.

Ouchterlony, O. (1953). Antigen antibody reactions in gels. IV. Types of reactions in coordinated systems of diffusion. Acta Pathol. Microbio. Scand. 32: 231-240.

Roblero, L., F. Beas and J. Arrau (1981 a). Uptake and incorporation of Uridine-H3, Leucine-H3 and Thymidine-H3 by delayed mouse blastocysts under the effect of ahu­man placenta protein (UTPH) and its antise­rum. Horm. Metab. Res. 13(3): 188-189.

Roblero, L., F. Beas and J. Arrau (1981 b). Embryo development under the effects of a new placenta¡ protein (UTPH) and its antiserum. Horm. Metab. Res. 13(2): 124­125.

Roblero, L., F. Beas, J. Arrau and I. Rojas (1983). Induction of implantation by a human uterotrophic placenta¡ protein (UTPH) in female mice and rats with delayed implantation. Horm. Metab. Res. 15(1): 53-55.

Sasser, R.G., J. Crock and C.A. Ruder (1989). Characteristics of pregnancy-specific protein B in cattie. J. Reprod. Fert. Suppl. 37: 109-113.