Introducción

Leucosis Bovina es una enfermedad linfoproliferativa, en la cual pueden distinguirse dos formas distintas de presentación de acuerdo a su patología y seroepidemiología:

A) Leucosis Bovina Esporádica, enfermedad de etiología desconocida que desarrolla tumores linfóideos, aparece como casos aislados dentro de un rebaño y se presenta en tres formas:

1) Juvenil, en animales menores de seis meses.

2) Tímica, en animales de siete a veinticuatro meses.

3) Cutánea, en animales adultos.

B) Leucosis Bovina Enzoótica, cuyo agente etiológico es un virus que pertenece a la familia Retroviridae, denominado Virus de la Leucosis Bovina (VLB). Esta enfermedad se caracteriza porque una vez establecida la infección, no puede ser eliminada, manteniéndose los animales como portadores asintomáticos de por vida o durante muchos años, desarrollando tumores solo una pequeña proporción de ellos. Este virus provee un modelo interesante para entender infecciones virales persistentes, como así también leucemias inducidas por Retrovirus exógenos, tanto a nivel de células como de individuos o poblaciones.

En nuestro país existen datos de la presencia de la enfermedad desde comienzos de la década anterior y estudios serológicos han revelado la existencia de animales seropositivos en importantes zonas de producción ganadera.

Particular viral y genona

VLB, como otros Retrovirus, está compuesto por: ARN, proteínas, glicosiladas y no glicosiladas, una enzima, ADN polimerasa-ARN dependiente (Transcriptasa Reversa).

Inmunológicamente está relacionado con el virus de la Leucosis Ovina (VLO), una entidad probablemente idéntica a VLB y con los virus de las leucemias humanas a células T (HTLV-I y HTLV)

GENOMA

El ácido nucleico posee un coeficiente de sedimentación entre 60 y 70 S, contiene los genes GAG, POL, ENV y una región px, que en la actualidad se la denomina tat (Trans-activatingtranscription). Se ha propuesto que el gen GAG codifica la síntesis de cuatro proteínas: p10, p12, p15, p24. El gen POL codifica la síntesis de las transcriptasa reversa y el gen ENV, determina la síntesis de las dos glicoproteínas gp51 y gp30. La gp51 es citada por algunos autores como gp60 o gp64. El genoma ARN del retrovirus es copiado a ADN por una enzima viral (ADN-polimerasa-ARN dependiente) y la copia de ADN es insertada en los cromosomas del huésped, esta copia de ADN llamada provirus, es transcripta a ARN genómico viral y ARN mensajero viral por enzimas del huésped. Sagata y col.  han reportado recientemente la secuencia completa de los 8714 nucleótidos que constituye el genoma viral de VLB integrado y dedujeron la siguiente organización: 5'LTR-GAG-POL-ENV-px-3' LTR. El virus no lleva un oncogene en el sentido generalmente aceptado para algunos retrovirus, lleva información capaz de inducir transformación y estaría codificada en la región px del provirus. Esta zona del provirus contiene 1817 pares de bases y está ubicada en la terminación del gen ENV. Codificaría para una proteína nuclear que aumentaría la actividad transcripcional del LTR (Long Terminal Repeat) o activador viral.

Se ha demostrado que la expresión del genoma de VLB en linfocitos está bloqueada reversiblemente 'in vivo' a nivel transcripcional, por una proteína no inmunoglobulínica presente en el plasma. Este factor que también bloquea la expresión viral in vitro no es interferón y su peso molecular es de 150.000.

Proteínas no glicosiladas

El virus presenta cuatro proteínas no glicosiladas constituyentes del core. La de mayor importancia es la p24. Si bien esta proteína muestra cierta homología con secuencias de la proteína p30 de algunos retrovirus, se la ha encontrado distinta de la proteína principal del core de la mayoría de ellos.

Sin embargo, se ha hallado una significativa homología en la secuencia de aminoácidos entre la p24 de VLB y la p24 de HTLV. Anticuerpos monoclonales contra la p24 identifican dos sitios antigénicos distintos sobre la proteína purificada. Los anticuerpos contra estos epitopes están presentes en el suero de animales infectados. Recientemente se han determinado tres. La p15 es una proteína fosforilada que se encuentra dentro de la partícula viral en dos localizaciones, por un lado ligada a la doble capa lipídica de la membrana viral y por otro al ARN. La p12 es básicamente una proteína con alto contenido de prolina y glicina, se encuentra próxima al ARN viral. (Fig 01).

FIGURA Nº1 MODELO DE LA ESTRUCTURA DEL VLB. (Uckert y col.)

Proteínas glicosiladas

Las mayores proteínas glicosiladas son constituyentes del envelope, son dos, gp51 y gp30, se encuentran asociadas, unidas entre si por puentes disulfuro (28) (Fig. N°1).

Ambas glicoproteínas son sintetizadas de un precursor común de peso molecular 72.000 D., la gp51 tiene 268 aminoácidos y la gp30 tiene 214.

La gp30 demostró sustanciales homologías con las proteínas de transmembrana de los retrovirus tipo B y C y también con una secuencia deducida de la región 3' del gen ENV del virus HTLV. Usando anticuerpos monoclonales se demostró la presencia de ocho epitopes en la gp51. La actividad biológica del virus (infectividad, inducción de sincicios y lisis celular por anticuerpo u complemento está relacionada con tres de los ocho epitopes de lá gp51 (Fig. N° 2).

FIGURA Nº2 MODELO DE LA ESTRUCTURA DE LA Gp51

Modelo propuesto para la localización de los epitopes reconocidos por anticuerpos monoclonales en la molécula Gp51. Bruck y col.

Portelle y col. señalaron que la reactividad antigénica de la gp51 con sueros inmunes naturales depende de la porción carbohidratada de la molécula. También se comprobó que los determinantes antigénicos de la gp51 que inducen anticuerpos neutralizantes, están sujetos a variaciones, considerando aislamientos del mismo o de distintos orígenes geográficos.

Transcriptaza reversa

Es una ADN-polimerasa-ARN-dependiente, que tiene un peso molecular de 40.000 a 70.000 D. según el método empleado para determinarlo. Un posible precursor de la transcriptasa es un producto de 145.000 D. detectado en células infestadas con VLB (28).

Relación con otros retrovirus

El VLB, como otros dos retrovirus humanos (HTLV-I y HTLV-II) difieren de otros retrovirus de leucemias y sarcomas en que ellos no contienen oncogenes derivados de la célula y no requieren viremia activa, ni un lugar determinado en la integración en el genoma del provirus, para producir transformación o leucemogénesis. Todavía es temprano para evaluarla probable relación entre VLB y el virus de la linfoadenopatía en humanos (VLA), que fue aislado en Francia de pacientes con Sida (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida) y no parecería con el HVI, aislado de pacientes con Sida en EE.UU.

Se cree que VLB y HTLVs son miembros de un grupo distinto de retrovirus, escencialmente caracterizado por la existencia de una región px entre el gen ENV y el 3' LTR .

Según el estudio de homologías y divergencias llevado a cabo entre VLB y HTLV, basado en el estudio del gen POL, que es el mejor conservado de los tres genes retrovirales, se demuestra que VLB está estrechamente relacionado a HTLV (45% de homología) y a los virus aviares tipo C (29% de homología) (cuadro N° 1).

Sagata y col. proponen constituir un grupo de Oncovirinae tipo E integrado por VLB y HTLV. Estos virus parecen ser morfológicamente algo diferentes de los tipo C de los mamíferos y se ha demostrado recientemente con la secuenciación de la región px, que se cree ha sido adquirida por el progenitor de VLB y HTLV (cuadro N° II). Los virus tipo C de aves y mamíferos han evolucionado muy lejos entre si, se debe notar que esta separación también está reflejada en el tipo de catión del que depende la transcriptasa reversa (Mg++, para los tipos B, D, CA y E; Mn++ para el tipo CM).

CUADRO Nº1 RELACIÓN DEL VLB CON OTROS RETROVIRUS

CUADRO Nº2 EVOLUCIÓN DEL GENERO ONCOVIRUS

PATÓGENIA

Patógenia

El período de incubación es largo hasta la aparición de los síntomas clínicos. Dependiendo de factores genéticos y ambientales, entre el 30% y el 70% de los animales portadores del virus desarrollan una enfermedad conocida como linfocitosis persistente (LP). Solo un bajo porcentaje (0,1%-10%) con o sin LP, desarrollan tumores linfoideos. El porcentaje de animales con LP que producen tumor varía ampliamente (10% - 85%). En LP, el ADN proviral fue encontrado integrado en una gran cantidad de sitios en el genoma, de un 25% a un 50% de los linfocitos circulantes. Secuencias del provirus fueron encontradas por ADN-ADN hibridización en linfocitos o en tejidos tumorales, pero no en otros tejidos que no estuviesen infiltrados por linfocitos. En la forma tumoral el ADN se encontró solo en pocos lugares del genoma de leucocitos y de células tumorales.

Los clones de células linfoideas correspondientes al linaje de linfocitos B pueden llevar copias completas o con delecciones parciales localizadas en la fracción 5' de la molécula de provirus, lo cual no influye para el mantenimiento del proceso neoplásico mientras que si ocurre en la fracción 3' de la molécula puede ser importante.

Kettmann y col. determinaron que en los portadores asintomáticos (seropositivos), el 5% del total de leucocitos llevan el provirus. Según lo demostrado por Ferrer y col., ni los anticuerpos adquiridos pasivamente, ni la inmunidad activa son efectivos en erradicar la enfermedad. Los anticuerpos contra la gp51 producidos por el huésped parecen no tener efecto protectivo contra la progresión de la enfermedad hacia la fase neoplásica. Habría modulación antígena que controla la expresión de los antígenos virales que no son expuestos en la superficie de los linfocitos infectados in vivo. En la mayoría de los casos el título de anticuerpos va elevándose con la evolución de la enfermedad hasta alcanzar un máximo con la muerte del animal en la fase tumoral.

En una inoculación experimental se observó proliferación de las células linfáticos y órganos viscerales. Los signos clínicos aparecieron a los 43 meses pos-inoculación y las lesiones linfosarcomatosas, fueron observadas en obomaso, corazón y tejido graso epidural de la médula espinal.

En algunos casos la presencia de linfosarcoma con incremento en el N° de leucocitos en sangre periférica (Linfosarcoma leucémico). Los animales con LP no tienen anomalías clínicas, no pierden peso, no disminuyen la producción láctea y se reproducen normalmente. LP no es una forma subclínica de linfosarcoma, es una respuesta distinta, a la infección por este virus, donde la constitución genética juega un rol importante.

Transmisión

Observaciones epizootiologícas han demostrado que VLB es transmitido fundamentalmente en forma horizontal. La transmisión congénita, aquella en que las madres enfermas pueden transmitir el virus al feto vía transplacentaria, es relativamente poco frecuente, aunque también puede ocurrir, el rol del virus libre en este modo de propagación no ha sido aún dilucidado. Algunos trabajos indican infección transplacentaria. Dada su condición de virus exógeno VLB, no se transmite a través del óvulo o del espermatozoide.

Como el virus libre es producido raramente in-vivo, se postula que la mayoría de los bovinos resultan infectados por exposición a linfocitos portadores. La transmisión por prevalencia estacional de insectos (mosquitos, tábanos, garrapatas) ocurre por contacto (4, 9, 53). En experimentos realizados por Takatori y col., trabajando con muestras de leche, orina, plasma, heces y homogeneizados de diversos tejidos, libres de células, no se aisló VLB infectivo salvo a partir de linfocitos, luego de cultivarlos in-vitro. Esto indica una diferencia respecto a otros Retrovirus de origen murino, felino, aviar, donde el virus es excretado de los animales infectados como entidades libres.

Se estudió la sobrevida de los linfocitos infectados en la leche y se halló que los constituyentes de la misma, no afectan la presencia del virus, mientras que la pasteurización a 63° C durante 30' inactiva los linfocitos infectados. Otra experiencia señala 63° C o 72° C 30' son suficientes para inactivarlo. La transmisión por leche es poco probable pero existen evidencias de terneros que han perdido anticuerpos materiales y han sido susceptibles a la infección por VLB a través de la ingestión de leche.

En un estudio se demostró que pequeños volúmenes de sangre total administrada por distintas rutas (IM, IV, SC, ID) fueron efectivas en diseminar la enfermedad, esto acentúa la hipótesis de que el uso de agujas comunes contribuye a la diseminación de la enfermedad.

Análisis serológicos

Se han usado diversos métodos para el diagnóstico de infección por VLB: Seroneutralización (SN), Fijación de Complemento (FC), Doble Inmunodifusión en gel de agar (DIDA), Inmunofluorescencia (IF), Radioinmunoensayo (RIA), Ensayo de formación de sincicios (EFS) y Elisa. Comparando las pruebas de Elisa y Dida, se demostró correlación de los resultados en un 93% de las muestras. El límite de sensibilidad para Dida, corresponde a un título de Elisa de 1/64. Meyer y col. (42) demostraron que Elisa detecta anticuerpos 5 semanas antes que Dida. La sensibilidad de Elisa es comparable al RIA, pero Elisa resulta más económico y rápido (8).

Jacobsen y col. compararon la prueba de Dida con RIA, demostrando una correlación del 94% cuando se leyó Dida a las 72 hrs., no observándose falsos positivos. Por la transmisión pasiva de anticuerpos en animales que han ingerido calostro y que tienen menos de 6 meses de edad, las pruebas serológicas no pueden ser usadas para diagnóstico a esa edad requiere demostración directa del virus por EFS. Terneros nacidos de madres infectadas fueron investigados serológicamente y virológicamente, antes y después de la ingestión de calostro, de 50 muestras pre-calostrales, 20% y 26% fueron positivas por Dida y SN respectivamente, indicando infección en útero. El análisis de muestras individuales de leche por Elisa estuvo de acuerdo en un 87% con la prueba de Dida en suero de los mismos animales y los títulos en suero se mantienen más elevados que en leche (2). Utilizando anticuerpos monoclonales en la prueba de Elisa, se encontró una buena correlación con la prueba de Dida, siendo la primera más sensible.

La prueba de Dida no es apropiada para el análisis de leche.

Otras especies susceptibles

BLV es un agente infeccioso y neoplásico para bovinos y afecta a ovejas y cabras en condiciones experimentales; también se ha logrado su transmisión a chimpancés, macacos, cerdos y conejos.

La posible infectividad de VLB para humanos es un aspecto interesante, las evidencias hasta ahora indican que la infección natural en humanos no ocurre, de todas maneras ante la posibilidad hipotética de que ocurran recombinaciones entre

virus humanos y VLB, desarrollándose nuevas entidades virales detrimentos para humanos, la eliminación de VLB de los alimentos y del medio ambiente es obviamente un hecho deseable.

Distintos grupos de investigación estudiaron la infección experimental en ovejas, demostrando el desarrollo de anticuerpos al mes de inoculadas. La mayor diferencia existente entre ovinos y bovinos es que en ovejas, la aparición del tumor es más común y las células tumorales son linfocitos T.

Aplicando la técnica de inmunoperoxidasa y utilizando como antígeno una línea celular persistentemente infectada con virus VLB, se detectaron anticuerpos específicos en 3 de 9 pacientes humanos con leucemias a células T pero no en pacientes con leucemias a células B, ni en personas con enfermedad de Hodgkin, ni tampoco en 200 sueros controles. Todas las muestras fueron negativas analizadas por Dida. Estudios realizados por Thiry señalan que linfocitos cultivados de pacientes africanos con Sida reaccionaron con antisuero de conejo obtenido contra antígenos de VLB (p24 y p51) analizados por RIA.

Epidemiología y control

Estudios realizados por Ferdinand y col. en terrenos sugieren controlar la infección VLB tomando en cuenta las siguientes recomendaciones:

1) Separar los animales en grupos positivos o negativos.

2) No recibir calostro o leche de vacas infectadas.

3) Usar toros seronegativos como reproductores controlándose cada 3 meses.

4) Realizar un control después de los 6 meses de edad, antes de ese período, los hijos de madres cero positivas deben ser considerados positivos y se les debe mantener asilados de los nacidos de madres negativas.

Donde las consideraciones económicas o genéticas impiden la eliminación de los reactores, es preferible la segregación de los portadores.

Este criterio permitió en Yugoslavia reducir el porcentaje de planteles positivos de 21,4% en 1981 a 2,9% en 1982. Para introducir nuevo stock genético en el plantel es preferible usar transferencia de embriones e inseminación artificial pues ambos recursos no implicarían un alto riesgo en la propagación del virus .

 

Vacunación

Se han realizado algunos intentos de producción de vacunas como el señalado por Miller y col. tratando al virus con etilenimina binaria, pero no lograron una completa inactivación viral. Se debe tener en cuenta que el uso del virus atenuado o células vivas como vacuna es peligroso particularmente trabajando con retrovirus, porque la información genética es insertada en el ADN celular. Theilen y col. prepararon una vacuna usando células linfoideas tranformadas no productoras de VLB (BL-3); esta línea celular es derivada de médula ósea y timo obtenidos de un ternero con linfosarcoma juvenil. Las células BL-3 no inducen viremia o respuesta de anticuerpos contra proteínas estructurales, pero la protección contra la infección viral fue evidente. Como no existe relación etiología entre el linfosarcoma juvenil y la Leucosis Enzoótica, se postula que la protección sería debida a antígenos tumorales localizados en la superficie celular (TATA: Associated Transplatation Antigen). Haciendo una proyección hacia el futuro, sería de utilidad para aplicación en gran escala, el desarrollo de una vacuna a partir de subunidades de la cubierta viral, libre del ARN viral. Aparentemente la glicoproteína de superficie gp51. es altamente inmunogénica y títulos de anticuerpos superiores a 1/8 protegen contra la infección a VLB. La fracción carbohidratada de este antígeno es fundamental par estimular la inmunidad. Por técnicas de ingeniería genética y considerando que los epitopes F. G y H de la gp51 tienen que ser usados como vacunas, su producción podría ser llevada a cabo en sistemas celulares capaces de una adecuada glicosilación del antígeno y de esta forma se podría obtener una inmunización efectiva.

Bibliografía seleccionada

- Aída. Y.: Onuma. M.: Ogawa. Y.: Ikami. T.: Ozawa, H.: (1985): 'Tumor associated antigens on bovine leu kemia virus-induced bovine lymphosarcoma identified by monoclonal antibodies'. Cancer Res., 45,3, 1174 - 1180.

- Aida, Y.; Onums, M.; Tsukiyama, Y.; Ogawa, Y.; Fujieda, T.; Mikami, T.; Izawa, (1987); 'Monoclonal antibodies define antiegenic regions on the major internal protein p24 Bovine Leukemia Virus (BLV). Arch. Virol. 94. 315 - 321.

- Bauer, T.; wiegand, D.; Manz, D.; 'Comparative serological studeis on blood and milk samples for diagnosis if enzootic bovine leukosis using the agar gel immunodiffusion test and Elisa' (1984). Deutsche Tierarztliche Wonchenschrift. 91, (9), 313 - 314.

- Baumgartener, L.; Olson, C.; Miller, J.; Vander Maaten, M. 1975; 'Survey for antibodies to leukemia (C-type) virus in cattle. '(1975). JAVMA, 166, 3, 249 - 251.

- Beech-Nielsen, S.;Piper, C.; Ferrer,J. (1978); 'Natural mode of transmission of the Bovine Leukemia Virus: role of bloodsucking Insects'. Am. J. Vet. Res. 39, (7). 1089 - 1092.

- Bruck, C.; Rensonnet, N.; Portetelle, D.; Burny, A.; Zavada, J. (1982); 'Tophographica analysis by monoclonal antibodies of BLVgp5l epitopes involved in viral functions'. Virology, 122, 353-362.

- Bruck, C.; N.; Portetelle, D.; Cleuter, Y.; Mammerickx, M.; Burny, A. Mamoun, R.; GuiIlemain, B.; Maaten, M.; Van Der, M.J.; Ghysdael, J. (1984); 'Biologically active epitopes of Bovine Leukemia Virus glycoprotein Gp 51; their dependence on proteine glycosylation and genetic variability'. Virology, 136, (1), 20 - 31.

- Brunel, C.M.; Mendoza, N.; Sosa, O.L.; Bulman, G.M. (1980); 'Primera determinmación en la provincia de Formosa (Rep. Arg.) del índice de prevalencia de Leucosis Bovina mediante la prueba serológica de inmunodifusión en gel de agar con antígeno glicoproteico'. Ill Congreso Argentino de Ciencias Veterinarias. 1980.

- Burny. A.: Bruck. C.: Cleuter. Y.: Couez. D.: Deschamps, J.; Ghysdarl. J.: leukemia. D.: Kettmann, R.: Mammerickx. M.; Marbais. G.: Portetelle. D. (1985); 'Bovine leukemia virus: a new mode of leukemogenesis'. Advances in viral Oncology, 5, Edited by George Klein. Raven-Press. N.Y.

- Buxton, B.A.; Hinkle, N.; Schultz, R. (1985); 'Role or insects in the transmission of bovine leukosis virus: potential for transmission by stables flies, horn flies and tabanids'. Am. J. Vet. Res., 46, 123 - 126.

- Cereda, P.; Debiaggi, M. ; Romero, E. (1984); 'Antibody to bovine Leukemia Virus in sera from leukemic patients'. Microbiológica, 7, (1), 107 – 112.

- Ciprian, F. Champredone, H. Martino, J. (1971); 'Estudio de las leucosis bovinas a nivel de los órganos linfoides'. Rev. Soc. Med. Vet., 52, (4), 209 - 271.

- Ciprian F.(1973);'Comprobación de la leucemia bovina en Argentina'. Rev. Medica Vet., 54, 2.

- Couez ,D,; J.; Kettmann, R.; Stephens, R.; Gilden, R.; Burny, A. (1984); 'Nucleotide sequence analyusis of the Long Terminal Repat of integrated Bovine Luekemia Provirus DNA and adjacent viral and host sequences'. J. Virol., 49, 615 -620.

- Drescher, B. ; Rossler, h.; Venker, P.; wittmann, W. (1979); 'Purification and characterization of bovine leukemia virus DNA polymerasa'. Arch. Geschwulstforsch 49, 569 - 579.

- Epstein, B.; Miranda, M.; Ciprian, F. (1971); 'Aspectros patológicos de los linfosarcomas en las diferentes especies domésticas'. (1971). Analecta Veterinaria, 3,1 - 3.

- Esteban, E.; Mettler, N. (1982); 'Leucosis Bovina: incidencia en un tambo de la prov. de Bs. As. 'Rev. Med. Vet. 62, 210 - 212.

- Esteban, E.; Thorm, R.; Ferrer, J. (1985); 'An Amplified Inmunoperoxidae assay to detect Bovine Leikemia Virus expression development adn compression with other assay'. Cancer Res., 45, 3231 - 3235.

- Esteban, E.; Ferrer, J. (1986); 'Caracterización inmunológica de las células tumorales en varios casos de linfosarcoma inducidos por el virus de la Leucosis Bovina (BVL)'. II Congreso Argentino de Virología.

- Evermann, J.; J.; Digiacomo, R.; Ferrer, J.; Parish, S. (1969); 'Transmission of bovine leukosis by blood inoculation'. Am. J. Vet. Res., 47, (9), 1885 - 1887.

- Ferrer, J.; Bhatt, D.; Abt,; Marshak, R.; Baliga, V. (1975); 'Serological diagnosis of infection with the putative bovine leukemia virus'. Cornell Vet 69, 527 - 542.

- Ferrer, J.; Pipper, C.; Abt, D. (1976); 'Natural transmission of the bovine C-type leukemia virus (BVL)'.

Bibl. Haematol., 43, 235 - 237.

- Ferrer, J.; Pipper, C.; Abt, D.; Marshak, R. (1977)' 'Diagnosis of bovine leukemia virus infection: evaluation of serologic and hematologic test by a direct infectivity detection assay'. Am. J. Vet. Res., 38, (12). 1977 - 1981.

- Ferrer, J.; Pipper, C. (1978); 'AN evaluation of the role of milk in the natural transmission of BLV'. Ann Rech. Vet. 9, (4), 803 - 807.

- Ferdinand, G.; Langstan, A.; Ruppanner, R. (1979); 'Antibodies to bovine leukemia infection'. Can. J. Comp. Med., 43, 173 - 179.

- Ferrer, J.; Masrshak, R.; Abt, D.; Kenyon, S. (1970); 'Relationship between lymphosarcoma and persistent lymphcytosis in cattle: a Review' JAVMA, 175, (7), 705 - 708.

- Ferrer, J; Cabradilla, C.; Gupta, P. (1980); 'Bovine Leukemia: a model for viral carcinogenesis'. Cold Spring Harbor Conferences on cell proliferation. (Essex, M.; Todaro, G.; Zurhansen, H.; Eds.). Vol. 7, 887 - 905.

- Fondevila, N. (1981); 'Leucosis Bovina Enzo'[otica' Rev. Med. Vet. 62 (2). 135-147.

- Ghysdael, C.; Bruck, C.; Kettmann, R.; Burny, A. (1984); 'Bovine leukemia virus'. Curr. Top. Microb. Immun., 112, 1 - 19.

- Gupta, P.; Ferrer, J. (1978); 'A critical comparison of teh virus neutralization radioinmunoprecipatation and immunodiffusion test for serological diagnosis of BLV infection'. Ann. Rech. Vet. 9, (4), 683 - 687.

- Gupta, P.; Ferrer, J. (1982); 'Expression of Bovine leukemia Virus genome is blocked by a nonimmunoglobulin protein in plasma from infected cattle'. Science, 215, 405 - 406.

- Gupta, P.; Kashmiri., S.; Ferrer, J. (1984); 'Transcriptional control of Bovine Leukemia Virus genome: role and characterization of non-immunoglobuline plasma proteine fron bovine leukemia virus infected cattle'. J. Virol. 50, (1), 267 - 270.

- Ishino, S.; Kono, Y.; Sentsui, H.; Yamamoto, H.; 'Lymphosarcoma in a bullock inoculated witch lymphocites from bovine leukemia virus infected cattle'. (1985). Jpn. J. Vet. Sci., 47, (6), 1007 - 1010.

- Jacobsen, K.; Kaneene, J.; Miller, J.; Bull, R.; 'Comparison of the commercial agar-gel immunodiffusion test and radioimmunoprecipitation assay for detection of antibodies to bovine leukemia virus'. (1985). Am. J. Vet. Res. 46, (7), 1430 - 1433.

- Kaja, R.; Olson, C.; Rowe, R.; Stauffacher, R. (1984); 'Establishment of a bovine leukosis virus free dairy herd'. J. Am. Vet. Med. Assoc. 184. 184. (2), 184 - 185.

- Kajikawa, O.; Koyama, H.; Sasaki, T.; Yoshikawa, T.; Saito, H. (1983); 'Studies on enzime-linked immunoabsorbent assay (Elisa) for detection of antobodies in cattle infected with bovine leukemia virus'. Jpn. J. Vet. Sci. 45, (3). 347 - 353.

- Kettmann, R.; Marbaix, G.; Cleuter, Y. (1980); 'Genomic integration of bovine leukemia provirus and lack of viral RNA expression in the target cells of cattle with different responses to BLV infection'

Leuk. Res. 4. (6). 509 - 519.

- Kettmann, R.; Deschamps, J.; Cleuter, Y.; Couez, D.; Burny, A.; Marbaix, G. (1982); 'Leukemogenesis by bovine leukemia virus: proviral DNA integration cellular sequences'. Proc. Natl. Acad. Sci. 79.2465 - 2469.

- Kono, Y.; Sentsui, H.; Araj, K. (1983); 'Serological to detect calves infected in utero with bovine leukemia virus'. Jpn. J, Vet. Sci. 45, (4), 453 - 456.

- Kono, Y.; Sentsui, H.; Arai, K.; Irishio, W. (1983); Studies of foetuses from cows clinically affected with bovine leukosis'. Vet. microb. 8. (5) 505 - 509.

- Mammerickx, M.; Potetelle, D.; Bruck, C.; Burny, A. (1984); 'Diagnosis of enzootic bovine leukosis with an immunossay test (Elisa) utilizing a monoclonal antibody' Ann. Med. Vet., 123, (1). 55 - 63.

- Meyer, U.; Schilow, W.; Starick, E. (1983); 'Comparison of the sensitivity of Elisa and the agar gel immunidiffusion test for detecting antibodies agains Bovine Leukosis virus'. Arch. Exp. Vet. Med. 37, (5). 661 - 666.

- Miller, J.; Van der Maaten, M.; Schamerr, M. (1983); 'Vaccination of cattle with binary

athylnimine-treated bovine leukemia virus'. Am. J. Vet. Re., 44, (1). 64 - 67.

- Nakmanson, V.; Dun, E.; Burba, J. (1983); 'Horizontal transmission of oncovirus infections'. Vet. Mos. (USSR), 8, 33 - 36.

- Onuma, M.; Watarai, S.; Sonoda, M. (1980); 'Detection of Bovine Leukemia Virus by syncytium assay'. Can. J. Med. 44, (3). 289 - 293.

- Parodi, A.; Manet, G.; Vuillaume, A.; Crespeau, F.; Toma, B.; Levy, D. (1983); 'Embryo transfer and transmission of enzootic bovine leukosis agent'. Bull. Acad. Vet. Fran., 56, (2). 183 - 189.

- Pasqualini, C. (1986); 'Retrovirus: de ratones y hombres'. Rev. Arg. de Micr. 183 y 4. 131 - 139.

- Pipper, C.; Abt. D.; Ferrer. J. (1975); 'Seroepidemiological evidence for horizontal transmission of bovine C-type virus'. Cancer. Res. 35, 2714 - 2716.

- Pipper, C.; Ferrer, J.; Abt, D.; Marshak, R. (1979); 'Postnatal and prenatal transmission of the BLV under natural conditions'. J. Nat. Cancer INST. 62, 165 - 168.

- Portetelle, D.; Bruck, C.; Mammerickx, M.; Burny, A. (1980); 'In animals infected by Bovine Leukemia Virus (BLV) antibodies to envelope glycoprotein gp5l are direct against the carbohydrate moiety'. Virology. 105, 223 - 233.

- Rice, N.; Stephens, R.; Couez, D.; Deschamps, J. (1984); 'The nucleotide sequence of the Env gene and post-Env region of bovine leukemia virus'. Virology, 138, (1). 82 - 83.

- Romero, C.; Abaracon, D.; Rowe, C. (1984); 'Bovine leukosis virus infectivity in Boophilus microplus ticks'. Vet. Rec. 115 (17). 440 - 441.

- Romero, C.; Cruz, G.; Rowe, C. (1983); 'Transmission of bovine leukemia virus in milk'. Trop. Anim. Healt Prod. 15. (4). 215 - 218.

- Rubino, M.; Donham, K (1984); 'Inactivation of bovine leukemia virus infected lymphocytes in milk'. Am. J. Vet. Res. 45. (8) 1553 - 1556.

- Ruffo, G.; Poli, G.; Bertone, A.; Cocilovo, A. (1983); 'Heat inactivation of bovine leukosis virus in milk and calostrum'. Soc. Ital. Scien. Vet. 37. 652 - 654.

- Sagata, N.; Yasunaga, T.; Ogawa, Y.; (1984); 'Bovine leukemia virus: unique-structural features of its long terminal repeats and its evolutionary relantionship to human T-cell leukemia virua'. Proc. Nat. Acad. Sci. 81, (15). 4741 - 4745.

- Sagata, N.; Yasunaga, T. (1985); 'Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukemia virus: its evolutionary relationship to other Retroviruses'. Proc. Nat. Acad. Sci. 82. 677 - 681.

- Schmied, L. M.; Pauli, R.; Ribet, A.; Ribet, S; Aloisi, G.; (1979). 'Primera comprobación serológica de la Leucosis Bovina en Argentina'. Rev. Med. Vet. 60, 2, 72.

- Schultz, A.; Copeland, T.; Oroszlan, S. (1984); 'The envelope proteine of bovine leukemia virus: purification and sequence analysis'. Virology. 135, 92). 417 - 427.

- Shettigara, P.; Samagh, B.; Lobinowich, E (1986); 'Eradication of bovine leukemia virus infection in commercila dairy herdes using the agar gel immunodiffusion Test'. (1986). Can. J. Vet. Res. 50. (2). 221 - 226.

- Suneya, M.; Onuma, M.; Yamamoto, S. (1984); 'Induction of lymphosarcoma in sheep inoculated with bovine leukemia virus'. J. Com. Path. 94. (2) 301 - 309.

- Schmied, L. (1979); 'Primera comprobación serológica de la leucosis bovina en Argentina: sus efectos sobre la capacidad reproductiva en vacas'. Rev. Med. Vet. 60, 72 - 80.

- Renner, J. E. (1973); 'Leucosis linfática en un ternero'. Gac. Vet. 35. 273, 132 - 135.

Monografías Med. Vet. 10(2), 1988

- Takatori, I.; Itohara, S.; Yonaiyama, K.; (1982); 'Difficulty in detecting in vivo extraceIlular infective virus in cattle naturally infected with bovine leukemia virus'. Leu. Res. 6, (4). 511 - 517.

- Tazzari, P.; Gobbi, M.; Guarini, A.; Tura, S (1968); 'Lymphocyte phenotypes in cattle infected with bovine oncovirus'. Arch. Vet. Ital. 37. (2) 101 - 104.

- Theilen, G.; Miller, J.; Higgins,J. (1982); 'Vaccination against bovine leukaemia virus infection'. Curr. Top. Vet. Med. Anim. Sci. 15, 547 - 559.

- Thiry, L.; Sprecher-Goldberger, S.; Jacauemin, P. (1985); 'Bovine leukemia virus related antigens in lymphocyte cultures infected with AIDS-Associated viruses'. Science, 227, 1482 - 1485.

- Uckert, W.; Wunderlich, V.; Ghysdael, J.; Potetelle, D. (1984); 'Bovine Leukemia virus (BLV) a estructural model vased on chemical crosslinking studies'. Virology, 133. 386 - 392.

- Uckert, W.; Hertling, I.; Kraft, R.; Bossmann, H. (1986); 'Structural components of bovine leukemia virus: further biochemical and immunological characterization of major structural proteins and glycoproteins Virus Res. 4. 343 - 356.

- Wong-staal, F.; Gallo, R. (1985); 'Human TLymphotropic retrovirus'. Nature, 317. 395 - 403.

- Tsudiyama, K.; Onuma, M; Izama, H. (1987); 'Effect of platelet-derived factor on expressionof bovine leukemia virus genome'. (1987). Arch. Virol. 96, 89 - 96.